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促病毒感染素

促病毒感染素

促病毒感染素

促病毒感染素(Infectin) 是我公司自主研发的病毒感染增强剂,它作用于病毒进入细胞和细胞内迁移的天然屏障-肌动蛋白细胞骨架,从而极大地促进有效感染率和病毒载体向细胞的递送效率。Infectin可用于基因治疗领域以促进病毒载体的递送,它还可以促进大分子(例如治疗药物,蛋白质或核酸)的细胞内传送,可广泛用于病毒学、分子生物学、细胞学、免疫学等研究领域,以及细胞和免疫治疗等临床领域(Yoder et al., Cell, 2008, 134:782)。

详细介绍

                                                  InfectinTM(促病毒感染素)— 病毒研究前沿技术

InfectinTM 是一种病毒感染增强剂, 旨在促进病毒穿透皮质肌动蛋白屏障, 从而大大提高病毒感染率。InfectinTM 可用于促进不同病毒和病毒载体对多种宿主细胞的感染。InfectinTM 可以提高病毒感染率520倍。Virongy 开发了 InfectinTM 是基于肌动蛋白细胞骨架的科学理论, 肌动蛋白细胞骨架是病毒进入和进入后细胞内迁移的天然屏障(Yoder et al, Cell, 2008, 134:782)


 

促病毒感染素  InfectinTM的特点:

1.  使用简易:向细胞悬液加入一定量Infectin3060分钟后即可开始病毒感染操作。

2. 安全无毒:只对感染细胞产生单一的特定作用,无细胞致毒性。

3.       :提升促病毒感染520倍,显著增加感染细胞的数量和每个细胞的m.o.i.

4. 储存方便-80oC可以长期保存,储存在4oC条件下可以保持3个月性状稳定。

5. 作用范围广:对很多细胞系都有强烈功效(增强程度受病毒和细胞类型影响)。

 

促病毒感染素  InfectinTM的应用:

1.  增强慢病毒或逆转录病毒感染靶细胞

2. 提高包膜病毒感染率

3. 促进从细胞或组织培养物中回收感染性病毒

4. 提升抗病毒药物筛选效率

 

实验例一: Infectin 增强CEM - SS悬浮细胞的慢病毒感染

1.   计数要感染的CEM - SS细胞,并以300×g速度离心5分钟沉淀细胞。注意 :细胞存活率应≥80 %.

2. 将细胞重新悬浮在于完全培养基中,细胞浓度为~2 x 106 cells /ml。

3. 感染时每次使用100μl细胞(~2 x 105 cells)。

4. 加入10μl InfectinTM ( 10X )进行预处理细胞,使 InfectinTM浓度由10X变为1X,混合并温育3060分钟。首次使用时,为了达到最佳效果,可以使用较高浓度的 InfectinTM。剂量可以通过滴定实验确定。例如,最终InfectinTM浓度可以是1 x2 x3 x等。

5. 向细胞中加入病毒并混合。注意使用的病毒量。

6. 再次加入InfectinTM ( 10X ),使用量相当于所用病毒量的1 / 10。例如,如果使用100μl病毒,则加入10μl  InfectinTM ( 10X )37培养2 - 4小时。第一次使用时,为了达到最佳效果,病毒溶液中可能会添加更多的InfectinTM,如4 中所述。

7. 加人1 ml新鲜完整培养基洗涤细胞,然后重复步骤1的操作,并除去上清液。(可选)重复一次,总共洗两次。

8. 洗涤后,将细胞重新悬浮在1 ml全培养基中。

9. 正常培养感染细胞,定量测定病毒复制。
 

实验例二:Infectin增强HDFn粘附细胞的慢病毒转导

1.  计数要感染的HDFn (人真皮成纤维细胞、新生儿)细胞,用6孔板(每孔2ml )每孔接种~ 5 x 105 个细胞。培养细胞,直到细胞稳定粘附在板上( 4 - 12小时)。注意:细胞存活率应≥80 %。

2. 感染前,用2ml培养基冲洗细胞,留0.5 ml培养基在每个孔中。

3. 加入50μl InfectinTM ( 10X )进行预处理细胞,使 InfectinTM浓度由10X变为1X,混合并温育3060分钟。首次使用时,为了达到最佳效果,可以使用较高浓度的InfectinTM。剂量可以通过滴定实验确定。例如,最终InfectinTM浓度可以是1 x2 x3 x等。

4. 向细胞中加入病毒并混合。注意使用的病毒量。

5.  再次加入InfectinTM ( 10X ),使用量相当于所用病毒量的1 / 10。例如,如果使用100μl病毒,则加入10μl  InfectinTM ( 10X )37培养2 - 4小时。第一次使用时,为了达到最佳效果,病毒溶液中可能会添加更多的InfectinTM,如3中所述。

6. 加人2 ml新鲜完整培养基洗涤细胞。

7. 洗涤后,加入2ml新鲜的完全培养基。

8. 正常培养感染细胞。
 

实验例三:Infectin增强Hep G2细胞的慢病毒转导:
在使用或者不使用InfectinTM ( 10X )情况下,将慢病毒 GFP载体转导至hep G2细胞。

 

   
                    表一
: InfectinTM 用于病毒感染的推荐体系

细胞数量

细胞液体积

InfectinTM (10 X )的用量

最终培养液体积

2 x 105

100 μl

10 μl

1 ml

5 x 105

250 μl

25 μl

2.5 ml

1 x 106

500 μl

50 μl

5 ml

2 x 106

1 ml

100 μl

10 ml

5 x 106

2.5 ml

250 μl

25 ml

1 x 107

5 ml

500 μl

50 ml

5 x 107

25 ml

2.5 ml

250 ml

1 x 108

50 ml

5 ml

500 ml


参考文献

Yoder A, Yu D, Dong L, Iyer SR, Xu X, Kelly J, et al. HIV envelope-CXCR4 signaling activates cofilin to overcome cortical actin restriction in resting CD4 T cells. Cell. 2008; 134(5):782-92. PubMed PMID: 18775311.

 


InfectinTM 产品目录

Cat No.

产品

价格

F0001

10 × Infectin, 200 μl

免费试用

F0002

10 ×Infectin, 0.5 ml

2,600

                 F0003                                  10 ×Infectin, 1 ml

4,800

长期保存于 -20 oC, 一旦解冻4 oC 至多可以保存3个月












InfectinTM仅用于科研用途,不能用于诊断或治疗目的,也不能用于人类或动物。

 






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